Association Between Anti-Proliferative Activity of Evernia Prunastri with the Cellular Apoptotic Pathway

Evernia prunastri (L.) Ach, belonging to Parmeliaceae, is an important lichen species in Turkey. Previous studies was reported that E. prunastri have significant antioxidant, antimicrobial and anticancer compounds in its structure. Although antiproliferative effects of E. prunastri are determined in some types of cancer, there is little information about the pathway of this activity. Accordingly, we aimed to determine the association between anti-proliferative activities of E. prunastri extracts with the cellular apoptotic pathway. Determination of cell viability was assessed by MTT assay. The xCELLigence system was used to monitor cell proliferation. To reveal induction apoptosis, expression of apoptotic pathway proteins, F-actin staining, ANNEXIN V/propodium iodide (PI) staining was used. As a result, E. prunastri MeOH extracts were found to have anti-proliferative activities especially in high doses (p<0.05 for 1, 5 and 25 µg ml^-1; p<0.01 for 125 µg ml^-1). Also, the extracts were found to be not inducing apoptosis in flow cytometric measurements. In addition, there was no significant decrease or increase in protein expressions of apoptotic pathway proteins. Lastly, density of actin filaments was not affected. MeOH extract of E. prunastri was found to have anti-proliferative activities, yet these anti-proliferative activities were not related to cellular apoptotic pathways.

Parmeliaceae’ye ait olan Evernia prunastri (L.) Ach, Türkiye yetişen önemli bir liken türüdür. önceki çalışmalarda E. Prunastri’nin yapısında bulanan kimyasallardan dolayı antioksidan, antimikrobiyal ve antikanser aktivitelere sahip oldukları belirtilmiştir. E. Prunastri’nin bazı kanser hücre tiplerinde antiproliferatif aktiviteleri bilinmekle birlikte bu aktivitenin yolağı hakkında bilgilerimiz oldukça sınırlıdır. Bundan dolayı, çalışmamızda E. Prunastri ekstraktının antiproliferatif etkileri ve hücresel apoptotik yolak arasında ilişkinin belirlenmesi amaçlanmıştır. Bu amaç için, meme kanseri hücrelerini E. Prunastri ekstraktlarına maruz bırakılmış ve hücre canlılığı MTT boyama ve xCELLigence system ile belirlenmiştir. Annexine V/PI boyama ile Apoptozun indüksiyonu, westernblot ile apoptotik proteinlerin ekspresyonu ve floresan boyama ile aktin flamentlerinin hücresel yoğunluğu belirlenmiştir. E. Prunastri MeOH ekstraktının yüksek dozlarda antiproliferatif etkiler göstermiştir (1, 5 ve 25 µg ml^-1 için p<0.05 ; 125 µg ml^-1 için p<0.01). Ancak ekstrakt uygulaması sonrasında apoptozun indüklenmediği ve apoptotik protein seviyelerinin değişmediği belirlenmiştir. Ayrıca F-aktin seviyesininde değişmediği gözlemlenmiştir. Sonuç olarak, E. Prunastri MeOH ekstraktının meme kanseri hücreleri üzerine antiproliferatif bir etkiye sahip olduğu ancak bu etkinin apoptotik yolakla ilişkili olmadığı düşünülmektedir.